Главная › Статьи о собаках › Ветеринарный справочник › Инфекционные заболевания собак
Инфекционные заболевания собак
Парвовирусный энтерит - Часть 1
08-10-2008 5479 0.0 0
Краткая характеристика

Парвовирусный энтерит (Parvovirus enteritis) - высококонтагиозная вирусная болезнь собак, характеризующаяся в основном острым геморрагическим энтеритом, обезвоживанием организма, лейкопенией и миокардитом. Важно отметить, что вирусные энтериты (гастроэнтериты) у собак может вызывать не только возбудитель ПВС-2, но и другие вирусы: коронавирус, ротавирус, вирус чумы плотоядных, инфекционного гепатита, смешанные инфекции и др. 

Так, например, в Австралии при патологоанатомическом вскрытии собак, болевших энтеритами, были обнаружены: в 30% случаев - парвовирус собак, в 2,6% - вирус чумы плотоядных и в 2% - коронавирус собак (П.Ф. Сутер, 1994, 1998 гг.).

Историческая справка

Как самостоятельная болезнь парвовирусный энтерит собак впервые был зарегистрирован в 1976 г. в Бельгии, в 1978 г. - в США, а затем в 1978-1981 гг. - в Австралии, Канаде, Англии, Италии, Франции и др. В России впервые болезнь зарегистрирована примерно в 1983 г. В настоящее время парвовирусный энтерит собак входит в группу 5 наиболее распространенных в России инфекционных болезней собак. ПВС1 впервые изолировали в Германии от армейской собаки в 1967г. 

Однако в последующем антитела к нему обнаружили в коммерческом препарате гипериммунной сыворотки, изготовленной в 1956г. такая находка свидетельствует о том, что данный возбудитель возник задолго до того, как стал известным ветеринарным специалистам. В последующем серологические обследования собак в Японии, США и Швейцарии показали, что инфекция ПВС1 распространена весьма широко: уровень серопозитивности к ПВС1 в этих регионах варьирует от 50 до 70%, т. е. большая часть собак встречается с этим вирусом на протяжении жизни хотя бы раз.

Возбудитель болезни

Заболевание вызывается ДНК-вирусом семейства Parvoviridae. Парвовирусы, как показывает их название ( parvus /лат./ - маленький), являются одними из наиболее мелких и просто устроенных вирусов эукариотов. Широко распространены в природе. В настоящее время идентифицировано более 50 видов парвовирусов. Современная их классификация основана на потребности в вирусе-помощнике для осуществления цикла репродукции, результатах анализа генома и круге восприимчивых хозяев.

По первому критерию парвовирусы делят на 2 группы, 1 из которых (хелперзависимые парвовирусы), образованная видом Dependoviruses, способна размножаться только после модификации клеток специфическими аденовиручами или герпесвирусами, обработки клеток ультрафиолетовым светом, циклогексемидом и рядом канцерогенов. Вторая группа (автономные парвовирусы), в которую входят роды Parvovirus, Erythrovirus, Densovirus, Iteravirus, Contravirus, в этом не нуждаются.

По Балтиморской классификации семейство Parvoviridae относят к классу II ДНК-вирусов. Оно состоит из двух подсемейств: Parvovirinae, или вирусов позвоночных, и Densovirinae, или вирусов членистоногих.

Оба известных парвовируса собаки ( ПВС ) относятся к роду Parvovirus, однако по своему гено- и фенотипу они принадлежат к разным филогенетическим кластерам рода Parvovirus. Самым ближайшим «родственником» ПВС типа I является парвовирус КРС, однако уровень гомологии генома обиъх агентов слегка превышает 40%, что не позволяет считать их членами одного кластера. ПВС типа 2 и подтипов 2а и 2b образуют с парвовирусами грызунов (за исключением парвовируса бурундука), других плотоядных (кошки, енота, енотовидной собаки, норки, за исключением вируса Алеутской болезни норок) самостоятельный кластер. 

Генетические различия ряда представителей последнего кластера настолько малы (например, ПВС2 и парвовирус енотовидной собаки), что их следовало бы считать не отдельными видами, а вариантами одного вида.

Согласно одной из гипотез эволюция парвовирусов шла по пути адаптации к новым хозяевам, что вполне согласуется с данными о том, что вирус панлейкопении кошек эволюционировал в 40-х гг XX века в вирус энтерита норки, а спустя немногим более 30 лет – в прототип ПВС. Этот агент в течение нескольких лет претерпел ряд изменений генома, которые позволили ему адаптироваться к репродукции в клетках миокарда и эритроцитах нового хозяина. 

Так, в 1977-78 гг появился ПВС типа 2 (ПВС2). В последующем он эволюционировал, претерпев еще несколько изменений генома и превратившись в подтипы 2а и 2b, способные в отличие от ПВС2, вызывать инфекцию у кошки. Последние два варианта условно называют подтипами, показывая тем самым их родство с родительским типом ПВС2. на самом деле таксономическое положение всех 3 вариантов абсолютно одинаково, и их следует считать равноправными типами одного и того же вирусного агента.

Таким образом, последовательное изменение всего лишь нескольких нуклеотидов в геноме обеспечило вирусу панлейкопении кошек охват новой экологической ниши – домашних и диких представителей семейства canidae. К которой после трансформации ПВС2 в подтипы 2а и 2b присоединился довольно широкий круг других плотоядных, в т. ч. кошка.

Морфология. Вирусные частицы не покрыты суперкапсидной оболочкой и имеют диаметр всего лишь 18-26 нм, что делает парвовирусы самыми маленькими вирусами эукариотов. Наиболее хорошо изучена морвология вирионов ПВС2. они образованы 60 капсомерами и имеют икосаэдрический тип симметрии, представляя собой частицы с 20 поверхностными фасетками, каждая из которых является равносторонним треугольником. 

У ПВС2 на поверхности каждой треугольной фасетки обнаружены щелеобразное (каньон) и более широкое (впадина) углубления. Соседние фасетки образуют на границе между собой грани, а группы из 5 фасеток в месте стыковки своих углов – вершины капсида. Каждый капсомер контактирует с ДНК. На поверхность капсида выходят мелкие отростки, образованные концами молекул структурных белков и придающие ей при электронной микроскопии шероховатый вид.

Состав вириона. Липиды и углеводы в составе вирионов не обнаружены, а масса образующих их белков и ДНК примерно равна.

Геном. Парвовирусы имеют уникальный геном, представленный линейной, одноцепочечной несегментированной инфекционной ДНК, образованной в среднем 5000 пар оснований. В отличие от остальных двух родов подсемейства Parvovirinae у представителей рода Parvovirus все вирионы содержат только негативную цепочку ДНК.

Цикл репродукции. Цикл репродукции парвовирусов во многих отношениях уникален. Он предусматривает: проникновение агента в клетку, превращение вирусного генома в 2-цепочечную ДНК под действием клеточных ферментов, транскрипцию ранних протеинови повторяющиеся циклы репликации 1-цепочечной вирусной ДНК, транскрипцию поздних протеинов под контролем протеинов агента, обособление вирусной геномной 1-цепочечной ДНК, сборку вирионов.

Устойчивость. Возбудитель ПВС2 очень устойчив в окружающей среде и при комнатной температуре может сохраняться в инфицированных объектах в течение 6 месяцев (П.Ф. Сутер, 1994, 1998 гг.; P.M. Гаскелл, М. Беннет, 1996, 1999 гг.). Парвовирус устойчив к хлороформу, эфиру, желчи, спирту. При 60 С инфекционная активность его не снижается. Вирус устойчив к кислой среде (сохраняется при рН 3). Длительное время сохраняется во внешней среде: в фекалиях и замороженных паренхимотозных органах - в течение года. Кипечение убивает его моментально. В течение суток погибает в 0,5%-ном растворе формалина, едкого натра или едкого калия.

Эпизоотологические данные

Наиболее восприимчивы животные культурных и декоративных пород. От больных к здоровым болезнь передается при контакте. 

Источником заражения могут быть больные собаки, собаки-виросоносители, грызуны, насекомые, а также человек. Также вирус может передаваться через предметы ухода и подстилку.

Для возникновения парвовирусного энтерита собак большое значение имеет наличин предраспологающих факторов: плохого ухода, содержания и кормления, стрессовых ситуаций - перемена владельца, операции, глистная инвазия, склонности к желудочно-кишечным расстройствам. Инкубационный период при парвовирусном энтерите составляет обычно от 4 до 10 дней, а у 1-2 месячных щенков - 1-3 дня.

Агент длительное время считался непатогенным («сиротским») вирусом и не привлекал к себе внимания. По этой причине и из-за сложности его репродукции в лабораторных условиях иммунологическая диагностика инфекции не была разработана. Исходя из этого становиться ясным, почему так мало информации можно найти о нем в доступной литературе.

Резервуар инфекции. В основном, резервуаром считаются большие стаи бездомных и, соответственно, непривитых собак.

Пути заражения. В эксперементальных условиях инфекцию ПВС2 удается воспроизвести орально-назальным, внутримышечном, внутривенном, подкожном и трансплацентарным путями заражения. Последний реализуется когда заражение сук происходит в период с 20 по 35 день щенности. По другим источникам заражение собаки в естественных условиях происходит в основном фекально-оральным способом через инфицированные ПВС корма и воду, а также контактным - при обнюхивании и облизывании непосредственно больных животных или инфицированных ими объектов внешней среды. 

Выделение вируса в кале начинается через 3-5 дней при пероральной инфекции и длится примерно 12 дней, редко – 25 дней. Другие выделения также могут быть заразными. Длительного выделения не наблюдается, однако при недостаточном образовании IgA может происходить периодическое выделение вируса. Выделение вируса собаками с субклиническим течением заболевания играет значительную роль.

Патогенез

Заболеванию подвержены собаки любого возраста, но наиболее восприимчивы к болезни щенки в возрасте от 2 до 16 недель. Это объясняется тем, что возбудитель ПВС-2 особенно быстро размножается в клетках с высоким уровнем митоза (основная форма клеточного деления), а у щенят в возрасте до 4 недель активно делятся клетки миокарда, позднее - клетки лимфоидной ткани, костного мозга и эпителия кишечных крипт (Р. Янсон и др., 1983 г.). Наиболее часто болезнь наблюдают у щенков, полученных от невакцинированных сук.

При естественном пероральном заражении воротами инфекции, по всей видимости, служат миндалины, пейеровы бляшки кишечника и мезентериальные лимфатические узлы собаки. Особую роль играют М-клетки. Они не составляют и 1% эпителиальных клеток кишечника. Но выполняют важнейшую функцию – доставляют макрофагам для распознавания проникшие в ткани кишечника чужеродные элементы. Таким путем возбудитель оказывается в циркулирующих макрофагах, а те переносят его по организму и, в первую очередь, в лимфоидные ткани (тимус, селезенку, костный мозг). 

Вирус размножается в В- и Т-лимфоцитах, что становится причиной виремии и лимфопении. В этот период у зараженного животного появляются системные клинические нарушения (повышение температуры тела, угнетение. В период виремии агент инфицирует разныне ткани организма, наиболее тяжело он поражает клетки миокарда плода и/или эпителиальные клетки ворсинок и крипт тонкого отдела кишечника. В пищеварительном тракте распространение вируса происходит от клетки к клетке.

Парвовирусный энтерит носит геморрагический характер и сопровождается изнуряющей рвотой, профузным поносом и тяжелым обезвоживанием организма. Интенсивное размножение бактерий в обогащенном кровью содержимом кишечника ведет к интоксикации организма. Из-за частой рвоты в острый период болезни животное не в состоянии принимать пищу и быстро теряет в весе.

С поражением лимфоидной ткани и циркулирующих лейкоцитов ассоциировано сотояние иммунодефицита. На его фоне вирусная инфекция осложняется вторичными бактериальными заболеваниями и глистными инвазиями ЖКТ.

Приблизительно на 4-6 день происходит деструкция крипт кишечника, вызванная активной цитолитической инфекцией возбудителя.

Организм быстро реагирует на вирусную инфекцию антительным ответом. Нейтрализующие антитела элиминируют возбудителя из тканей, что сопровождается регенерацией поврежденных тканей у выживших животных. Однако в эпителии кишечника антителами лишь частично ингибируется репродукция и распространение агента. Поэтому во многих случаях вирус в высоких титрах выделяется с фекалиями в среднем на протяжении 10 дней.

Гибель больных парвовирусным энтеритом щенков обычно происходит в результате необратимой утраты поврежденной слизистой оболочки кишечника осморегуляции, осложнения течения болезни бактериальным сепсисом и/или диссеминированной внутрисосудистой коагулопатией.

Патоморфология.

Мезентериальные и поверхностные лимфатические узлы в начале заболевания увеличиваются и становятся отечными. На разрезе они сочные и покрасневшие, а в корковом слое видны петехиальные кровоизлияния. В последующем размер лифоузлов уменьшается за счет атрофических изменений герменативных центров.

Аналогичные изменения тимуса приводят к уменьшению его объема на 1/3. Наиболее тяжелые поражения отмечают в коре органа.

Костный мозг, как правило, темно-красный и размягченный. При гистологическом исследовании в нем часто выявляют уменьшение количества миелоидных, эритроцитарных и мегакариоцитарных клеточных элементов.

При исследовании щенков, заражение которых произошло в перинатальный период развития, частой находкой служит миокардит. В настоящее время его регистрируют крайне редко в силу того, что подавляющее число сук серопозитивны (поскольку перенесли эту инфекцию или вакцинацию) и защищают свое потомство от заражения этим агентом нейтрализующими антителами. 

Миокард бледного цвета, дряблой консистенции с очагами минерализации и бледно-розовыми полосами. При подостром течении миокардита, как правило, одновременно обнаруживают гидроторакс, гидроперикардит, асцит и застой крови в печени, а при остром миокардите – тяжелый отек легких. При гистологическом исследовании миокарда отмечают многочисленные некрозы и легкую инфильтрацию лимфоцитами. В хронических случаях имеет место интерстициальный фиброз миокарда.

При наиболее часто регистрируемой алиментарной форме клинического проявления инфекции основные изменения обнаруживают в тонком отделе кишечника (преимущественно тощей и подвздошной кишках). Поражения носят сегментарный характер. Кишечник заполнен жидкими слизистыми или крловянистыми массами. Его слизистая оболочка набухшая, утолщеная, имеет студенистую консистенцию, красный или темно-красный цвет, усеяна многочисленными точечными кровоизлияниями. 

Серозная оболочка часто геморрагически изменена и шероховата из-за отложений фибрина. При гистологическом исследовании в кишечнике выявляют атрофию ворсинок, некроз эпителия крипт и пейеровых бляшек. Слизистая оболочка инфильтрирована нейтрофилами и эозинофилами в легкой или средней степени.

На поздних стадиях болезни наблюдают регенерацию эпителия и гиперплазию крипт. В толстом отделе кишечника изменения слабо выражены или отсутствуют. Содержимое его черно-красного цвета, а слизистая оболочка набухшая, неравномерно покрасневшая, покрыта тягучей полужидкой слизью.

Эозинофильные тельца-включения обнаруживают в клетках очагов поражений лимфоидных органов (изредка), эпителии кишечника и языка. При проведении диагностических исследований последний наиболее часто исследуют на наличие телец-включений вследствие того, что эпителий кишечника подвержен аутолизу в меньшей степени, чем другие ткани – обнаружить тельца-включения в аутолизированной ткани весьма затруднительно.

Течение и симптомы

Заболевает около 10% собак, спонтанно подвергшихся воздействию ПВС2, у остальных в результате инфицирования вырабатывается иммунитет. Уровень смертности колеблется между 1 и 10%, в срок от 6 нед до 6 мес, погибают преимущественно старые собаки. 

В случае необратимых нарушений гомеостаза животные погибают через 2-4 дня после начала болезни. При более длительном течении болезни (подострая форма) и правильном лечении вероятность выздоровления возрастает. При сверхострой форме болезни смертность среди щенков при групповом содержании может достигать 80-95%, при индивидуальном (комнатном) - 50-60%, а при острой форме соответственно 30-50% и 20-30%.

В зависимости от степени выраженности клинических признаков условно разделяют три основные формы болезни: сердечную, кишечную и смешанную.

Для начала рассмотрим общие для всех форм клинические признаки. Инкубационный период колеблется от 4 до 10 дней в среднем и разделяется на ИП до виремии (2-3 дня) и ИП до появления клинических признаков (4-7 дней). У взрослых животных, в отличие от щенков (см. ниже), лихорадка отсутствует или выражена слабо, в результате чего она остается незамеченной и не оказывает влияния на общее состояние.

 В последующей период температура снижается до нормальных показателей или даже ниже физиологической нормы. На всем протяжении болезни у животного проявляются: депрессия, анорексия, профузная диарея и изнуряющая рвота. Рвотный акт в зависимости от тяжести поражения ЖКТ повторяется с интервалом от 30 мин до нескольких часов. Прием воды или пищи провоцирует его, поэтому собаки отказываются от того и другого ( в начале заболевания животные моментально отказываются от пищи, но делают попытки пить, затем прием воды также прекращается). Итогом становятся прогрессирующее обезвоживание и кахексия. 

Клинически обезвоживание организма проявляется западением глазных яблок при интенсивной гиперемии конъюнктивы, быстрым исхуданием животного вследствие истощения жировых депо, снижением тургора кожи. Фекальные массы заболевших собак жидкие, имеют чрезвычайно неприятный запах, желто-оранжевый цвет, а при типичном течении болезни в них. На 2-3 день появляется кровь (мелена), далее мелена носит прогрессирующий характер.

При остром течении инфекции летальный исход может наступить в течении 1-6 дней после появления первых симптомов болезни. Летальность очень высока – без лечения погибает 40-60% заболевших щенков. Но даже интенсивная терапия не дает гарантий выздоровления. При проведении эффективного лечения выздоровление наступает в течении 1-1,5 недель, что во многом определяется динамикой развития у больного животного иммунитета.

Характерные изменения картины крови при парвовирусном энтерите собак встречаются редко и в большинстве случаев не выражены. Ниже приведены данные, полученные ветеринарными врачами Гизатуллиной Ф. Г. и Гизатуллиным А. Н. (УГАВМ), проведенные на базе Магнитогорской станции по борьбе с болезнями животных и кинологического центра «Алька»:

«Собаки поступали на прием на 2-3 день болезни. Среди 312 больных животных были собаки разных пород, возраст от 2,5 до 15 месяцев.

При исследовании крови у поступивших в клинику больных животных количество эритроцитов колебалось в пределах 2,60-4,63•1012/л, лейкоцитов - 1,5 - 10,46*109 /л, гемоглобина - 180-220 г/л, цветной показатель - 3,96, относительная плотность крови - 1,124-1,246, рН-6,93-7,04. Изменения морфологических и физико-химических показателей крови связаны с потерей организмом большого количества жидкости, солей и щелочных оснований.

Снижение количества лейкоцитов наблюдалось только у 84,6% животных, хотя характерные клинические признаки были у всех собак.

У больных собак развивалась относительная нейтрофилия со сдвигом ядра влево - до появления юных (1,5%) и увеличения числа палочкоядерных клеток, в среднем, в 2,7 раза, а сегментоядерных - на 8%. Содержание лимфоцитов уменьшилось в 1,8 раза, эозинофилов - в 5,4 раза, моноцитов - в 2,5 раза.

Уменьшение содержания эозинофилов в крови отражает снижение сопротивляемости организма. Как отмечает Ю.Н.Федоров с соавт. (2000), инфицирование вирусом приводит к поражению моноцитов, вторичная репликация вируса в костном мозге и действие парвовируса на деление стволовых клеток приводит к лейкопении. Данные лейкоцитарной формулы свидетельствуют о состоянии иммунной недостаточности связанной с подавлением клеточного звена иммунного ответа.

При исследовании крови на 4-5 день у 58,3% собак отмечался лейкоцитоз (15,4-18,9*109 /л ). Эти животные впоследствии выздоровели, а собаки с прогрессирующей лейкопенией - погибли.

Сравнительный анализ гематологических показателей на 2-3 день болезни от 22 выздоровевших животных и от 8 погибших в течение первых 5 суток позволило сделать вывод о возможности прогнозирования исхода болезни у животных при поступлении в клинику. 

Так, количество лейкоцитов (1,3+-0,2*109 /л ) и эритроцитов (2,6±0,2•1012/л) от собак 2-ой группы было достоверно ниже (Р<0,001), чем у выздоровевших (1-ая группа). У собак 2-ой группы было отмечено более высокое содержание гемоглобина - 221,3+-8,8 г/л(Р<0,05), относительная плотность крови - 1,22±0,01 (Р<0,001), по сравнению с выздоровевшими. Также у собак с неблагоприятным исходом болезни наблюдалось уменьшение рН -6,95±0,01 (Р<0,01).

После проведенного лечения (на 10-12 день) при анализе лейкоцитарной формулы установили, что содержание базофилов нормализовалось, эозинофилов - увеличилось в 2 раза по сравнению с исходным уровнем, юных – уменьшилось в 3, ПЯ – в 1,8, СЯ – на 38%, лимфоцитов – увеличилось в 3,1 раза, моноцитов - на 50 %.

 Эозинофилия при инфекционном заболевании свидетельствует о стадии выздоровления. Вслед за восстановлением процента эозинофилов в этой стадии начинает снижаться содержание лейкоцитов, постепенно исчезает сдвиг ядер нейтрофилов влево. Моноцитов отражает повышение функциональной активности клеток макрофагально-фагоцитарной системы. Далее отмечается лимфоцитоз за счет снижения процента нейтрофилов, обычно сопровождающий период затихания воспалительных процессов.

Таким образом, морфологические и физико-химические показатели крови у собак при парвовирусном энтерите существенно изменяются и зависят от стадии и тяжести патологического процесса. Данные гематологических показателей удовлетворяют практическим запросам ветврача, их можно использовать при определении прогноза и целесообразности лечения с учетом клинических исследований. Изучение лейкограммы позволяет оценить иммунный статус и определить правильную лечебную тактику. В дальнейшем при благоприятном прогнозе наблюдают сдвиг лейкоцитарной формулы влево, значительный лейкоцитоз (свыше 20 тыс. в 1 мм3) и моноцитоз.»

Выделяют несколько форм течения парвовирусного энтерита собак, которые описаны ниже.

Сердечная форма (миокардитная) характеризуется прежде всего острым поражением миокарда (вирусный миокардит) и наблюдается, как правило, у щенят в возрасте от 2 до 8 недель. Болезнь наступает внезапно и протекает молниеносно. Щенки отказываются от корма и воды, не могут самостоятельно сосать молоко у матери. У больных животных наблюдают резкую слабость, одышку, сердечно-сосудистую недостаточность: пульс аритмичный, слабого наполнения. 

Щенки погибают в течение 24-48 ч в состоянии коллапса. В первый день клинической стадии у щенков, не достигших 3-4 месячного возраста отмечают лихорадку (40-41С). Эта форма сочетается с кашлем, особенно в ночное время, и одышкой, усиливающейся после физической нагрузки.

Кишечная форма (интестинальная) - наиболее типичная форма парвовирусного энтерита. В ее основе лежит катаральный или геморрагический еюнит-илеит (не гастрит!). Протекает обычно в острой, иногда в подострой формах. 

Главными признаками болезни являются длительная и неукротимая рвота (80% случаев), повторяющаяся многократно в течение нескольких суток, полный отказ от корма (анорексия) и воды. Необходимо подчеркнуть, что в отличие от других кишечных вирусных болезней (чума плотоядных, инфекционный гепатит и др.) при парвовирусном энтерите собаки в течение 1-3 дней не пьют воду, молоко и другие жидкости. Это обусловлено обширными катаральными или геморрагическими поражениями тонкого и толстого кишечника, которые вызывают резкую боль.

Диарея (от 5 до 100% случаев) появляется у животных через 1-3 дня после начала рвоты и продолжается от 2 до 10 дней. Каловые массы первоначально слизистые, затем становятся водянистыми, кровавыми с характерным зловонным запахом. Неукротимая рвота и длительный понос вызывают сильное обезвоживание организма и соответственно - глубокие нарушения гомеостаза (относительного динамического постоянства внутренней среды и устойчивости основных физиологических функций организма). У больных животных отмечают резкую слабость, значительное истощение, сердечно-сосудистую и легочную недостаточность и др.

Смешанная (комбинированная) форма болезни характеризуется различными поражениями сердечно-сосудистой, пищеварительной и дыхательной систем организма. Наблюдается у животных с ослабленной иммунной системой, у щенят, полученных от невакцинированных сук, а также при наличии ассоциированных инфекций (адено-, корона-, ротавирусных и др.). Клинические признаки болезни весьма многообразны. Кроме описанных выше симптомов дополнительно отмечают катаральные воспаления верхних и нижних дыхательных путей.

Температура тела при острой форме болезни в начальной стадии часто повышается до 40-41,5°С ( в основном у щенков), сохраняется на этом уровне 2-3 дня, затем или постепенно нормализуется (благоприятный прогноз), или быстро снижается ниже 37°С (летальный, или неблагоприятный прогноз).

Патологанатомические изменения

При парвовирусном энтерите отмечают сильное истощение животных и обширные катаральные и геморрагические воспаления тонкого и толстого отделов кишечника (особенно тощей, подвздошной и ободочной кишок), а также миокардиты и отеки легких. 

Однако главным образом находят изменения в первую очередь в кишечнике. Слизистая оболочка его набухшая, неровная, катарально или геморрагически воспалена. Содержимое кишечника жидкое, фекальные масся дурно пахнут, окраска их от грязно-желтой до темно-красной. Иногда на слизистой оболочке кишечника имеются эрозии. В фекалиях содержится много слизи и желчи. Селезенка немного увеличена с инфарктами и фипброзными пленками. Мезентериальные лимфоузлы увеличены, геморрагически воспалены. 

У отдельных животных поражается проксимальная часть ободочной кишки, наблюдается отек легких, миокардит. Костный мозг, как правило, темно-красный и размягчен.

При гистологическом исследовании видна атрофия эпителия либеркюновых желез во всем тонком кишечнике, причем нет различия в единичных сегментах кишечника. Разрушения крипт кишечника может проявляться локально или диффузно в некоторой зависимости от длительности болезни. Просвет крипт часто наполнен дентритом и более или менее расширен. Поверхность эпителия ворсинок также разрушена, что может быть обнаружено только в свежих случаях вскрытия животных.

Некрозы могут встречать в лимфатических тканях, лимфатических узлах, тимусе.

У щенков в возрасте 4-6 недель наблюдали подострый фибринозный миокардит, а в мышечных волокнах сердца внутриядерные включения. В ядрах клетов сердечной мышцы в этих случаях под электронном микроскопом в большом количестве выявляли парвовирус.

Диагноз

Предварительный диагноз на парвовирусный энтерит ставят на основании результатов эпизоотологического анализа, клинических и, в результате летального исхода, патологоанатомических исследований, а окончательный – по результатам лабораторных методов диагностики, направленных на обнаружение возбудетиля, его ДНК или его антигенов.

Предварительный диагноз. Данные о массовом заболевании щенков моложе 6-месячного возраста на определенной территории, сопровождающимся присущей парвовирусному энтериту симптоматикой, дают основания предполагать вспышку павровирусной инфекции. Факи вакцинации заболевшего животного против этого заболевания не позволяет полностью его исключить, но анамнестические сведения о том, что оно не было привито до заболевания, служит дополнительным поводом для постановки такого предварительного диагноза. Не следует упускать возможность подтверждения такого диагноза выявлением лейкоцитоза у животного.

При подозрении на парвовирусный миокардит диагностическую информацию может дать электрокардиография.

Наличие рвоты, которая выражена до конца болезни и не поддается лечению антибиотиками, свидетельствуют о парвовирусной этиологии болезни.

В случае гибели собаки проводят ее вскрытие. После констатации описанных выше патологоанатомических изменений в лабораторию для проведения гистологического исследования отсылают пробы пораженных участков кишечника, язык (целиком или его часть), сердце, мезентериальные лимфатические узлы и трубчатую кость (для исследования костного мозга).

Окончательный диагноз. Основаниями для постановки окончательного диагноза служат обнаружение и/или изоляция возбудителя, его антигенов и нуклеиновой кислоты в патматериале, взятом от собаки, подозреваемой в заражении ПВС, а также установлении у нее сероконверсии к этому агенту.

Патологоанатомическое исследование. Обнаружение описанных выше патологогистологических изменений в кишечнике, миокарде, лимфатических тканях, костном мозге и, что имеет особое диагностическое значение, внутриядерных эозинофильных включений в клетках этих органов и слизистой оболочке языка, облегчает постановку окончательного диагноза на парвовирусный энтерит.

Мазки биоптата костного мозга тестируют на наличие токсических и дегенеративных изменений клеток миелоидного и мегакариоцитарного рядов.

Обнаружение возбудителя, его антигенов и ДНК. С этими целями могут быть использованы: электронная микроскопия, иммуноцитохимические методы, изоляция возбудителя на культуре клеток, молекулярные методы диагностики.

Электронная микроскопия требует дорогостоящего оборудования и высококвалифицированных специалистов, что не позволяет считать ее рутинным методом диагностики инфекции, однако, с ее помощью диагноз может быть поставлен в кратчайшие сроки и при жизни животного на основании обнаружения возбудителя в фекалиях животного. Она позволяет выявить парвовирус даже в низком титре, не превышающем 10і-10 вирионов/г.

Иммуноцитохимические методы включают в себя реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментного анализа (ИФА). Тонкие срезы тканей исследуют на наличие вируса в этих реакциях, которые оказались пригодными для исследования свежих, замороженных и фиксированных ыормалином тканей. РИФ отличается большей простотой, но хуже выявляет локализацию антигена в клетках по сравнению с ИФА.

Метод иммунохроматографического анализа основан на использовании хроматографических мембран в качестве твердого носителя специфических антител к белкам VP1 и VP2 возбудителя. Набор для его проведения выпускается в нашей стране НПО «Нарвак» совместно с Европейской Ветеринарной Лабораторией (EVL, Нидерланды).

Применяются также РГА (реакция гемагглютинации) и РТГА (реакция торможения гемагглютинации), которые основаны на способности ПВС агглютинировать эритроциты определенных видов животных (свинья, обезьяна-резус, кошки). Они отличаются простотой постановки и возможностью быстрого получения результата. По чувствительности РГА уступает РИФ, ИФА и ЭМ. При проведении РГА диагностическим считают титр 1 : 64.

Также проводят РЛА (реакция латексагглютинации), которая основана на агглютинации латексных частиц с моноклональными антителами к агенту. Тест дает высокое совпадение показаний с ИФА и РГА, уступая по чувствительности только первой на 4%, а по специфичности – обеим реакциям на 2-3%. РЛА позволяет выявить парвовирусный антиген в концентрации 150 нг/мл. РЛА на стекле (микровариент) в 4-5 раз менее чувствителен, но пригоден для полевых условий и позволяет обнаружить вирусный агент в течение 2 минут. 

Для обнаружения ПВС2 в фекалиях собак с помощью РЛА выпускается набор Rapid™ Parvovirus (Sinovius Biotech Inc). В него входит иммунострипы с зафиксированными латексными частицами, которые покрыты антителами к ПВС2. При наличии в фекалиях вирусного агента образуется комплекс, который мигрирует по иммунострипу и, достигнув индикаторной полосы с конъюгатом антивидовых антител, меняет ее цвет.

Реакция коагглютинации или коагуляционный тест был разработан для обнаружения вируса в фекалиях. При его постановке предварительно инкубируют антисыворотку к ПВС с суспензией S. аureus. При добавлении к стафилококкам с сорбированными антителами надосадочной жидкости суспензии фекалий инфицированных животных, содержащих вирусный антиген в титре >=1 : 8, в течение 2-3 минут происходит агглютинация бактерий. Простота постановки реакции и отсутствие необходимости в каком-либо лабораторном оборудовании делает ее пригодной для диагностики ПВС2 в полевых условиях.

РИФ применяют для обнаружения возбудителя в патматериале и зараженных культурах клеток. Тест проводят с применением флюоресцирующих антител к ПВС или вирусу панлейкопении кошки. В качестве носителя антител используются полиакриламидные гранулы.

ИФА, в свою очередь, оказался одним из наиболее чувствительных методов обнаружения возбудителя в патматериале. При тестировании фекалий он выявляет около 1,5 нг вирусного антигена, что приблизительно соответствует 10і вирионов/г. затраты времени, необходимого для получения результатов, и стоимость реактивов невелики. 

Для проведения ИФА для диагностики инфекции ПВС ряд фирм (НПО «Нарвак», Iddex Corp, Tech-America и др) выпускают наборы диагностикумов. В них специфические иммуноглобулины или моноклональные антитела фиксированы в ячейках полистироловых планшетов, на нитроцеллюлозной мембране, латексных или золотых частицах.

Изоляцию возбудителя в культурах клеток обычно предпринимают в тех случаях, когда другие лаборатории методы диагностики дали трудно интерпретируемые результаты или при постмортальном исследовании, когда нет ограничений во времени для получения результатов экспертизы. В первую очередь это связано с острым характером инфекции у собак.

Размножение агента в культуре клеток обычно сопровождается деструкцией монослоя, но судить о специфическом характере последнего можно только по образованию на 8-15 день после заражения внутриядерных цитоплазматических телец-включений, по результатам ЭМ и РИФ.

Кроме того, для диагностики ПВС применяют ПЦР (полимеразная цепная реакция), которая по чувствительности в несколько раз превосходит ИФА и изоляцию возбудителя. Эта реакция предусматривает специфическую амплификацию ДНК агента из тестируемой пробы фекалий.

Используется и ДНК-зондирование – с помощью меченого дигоксигенином зонда, комплементарного участкам вирусных генов VP1 и VP2, удается обнаружить ДНК агента в срезах фиксированного формалином патматериала – тонкого отдела кишечника, миндалин, лимфатических узлов, тимуса, селезенки, сердца, печени и почек инфицированных собак.

В серологической диагностике для выявления вирусспецифических антител применяют РТГА (реакция торможения гемагглютинации), которая является стандартным методом, РНГА (реакция непрямой гемагглютинации), РН (реакция нейтрализации), РЛА, РНИФ (реакция непрямой иммунофлюоресценции), ИФА и встречный иммуноэлектрофорез. Чувствительность и специфичность перечисленных тестов во многом определяется качеством используемого антигена.

РН является высокочувствительным методом, используемым преимущественно при выборе схемы вакцинации (сроков, препаратов и т. п.) и, в меньшей степени, оценки уровняиммунитета животного к ПВС. Тест проводят в культуре клеток с поятоянным количеством вируса и 2-кратными разведениями тестируемой сыворотки. Результаты РН учитывают в РИФ. Протективным считают титр нейтрализующих сывороточных антител, превышающий 1 : 16.

РНИФ, в свою очередь, соответствует, но по специфичности уступает РТГА. Видимо, это связано с широким применением культуральных вакцин, индуцирующих развитие антительного ответа не только к вирусным агентам, но и к белкам клеток тех культур, на которых проводилась репродукция вакцинных штаммов. Тем не менее, тест может быть использован для оценки поствакцинального антительного ответа у собаки.

Парвовирусный энтерит - Часть 2

Комментарии (0)
avatar